момента молекулярна диагностика разработени механизъм на полимеразна верижна реакция (PCR), която е стимул за развитието на голям брой методи за диагностика, въз основа на определяне на генетичния материал.За извършване на PCR в реално време, използвайки генен фрагмент (по-специално нуклеинова киселина) на причинителя, които не се намира в други индивиди.
принцип на PCR е размножаването на определен патоген ДНК фрагмент милиони пъти с ДНК полимераза в специално устройство, по-нататък термоцикльор, която осигурява повтаряне на режима на температурно циклиране, съгласно предварително определена програма.
Diagnostics PCR позволява да се повтаря поредица от уточнения, поддържане на ензимната активност.Когато усилването се извършва плавно, в един цикъл на броя на копията на определен участък от ДНК на патогена се удвои, след тридесет цикъла - сто и десет.Ето защо PCR се използва за определяне на диагнозата на достатъчно малки патогени, идентифицирането на което е невъзможно без него.
Следва да се отбележи, че РНК не може да бъде образец за реално време PCR.Следователно, с цел откриване на вирусна РНК преди амплификацията необходимо за получаване на ДНК корелира с неговия съответен фрагмент.Полимеразната верижна реакция позволява да се измери ДНК и РНК на патогена.Така получената информация се използва за мониторинг на ефективността на терапията, и клиничната оценка на прогнозата.
В допълнение, в реално време PCR не изисква допълнителни действия по отношение на разшифроването на целевата ДНК или ампликоните, които служат като бариера за правилната диагноза и да доведе до неверни резултати.Този подход ни позволява да не се използва етап на електрофореза, което води до намаляване на риска от замърсяване на полимеразна верижна реакция.Също така, в резултат на намаляването на броя на текущата манипулиране на патогена, намалява времето на изследването, това опростява процеса, намалява вероятността от грешки.PCR също ви позволява да определите началната броя на копията на ДНК на патогена в клинично изпитване, за да помогне за идентифициране на периоди на обостряния и да вземат своевременни мерки, за да излекува пациента.
Днес има много методи за отразяване в реално време усилване.Най-често се използват различни техники, използвани корелира с ампликон флуорогенни сонди, интензивността на излъчване на които варира в зависимост от натрупването на ампликон и записани в реално време с помощта на специален инструмент, наречен термоциклер с оптичен модул.Това осигурява висока степен на чувствителност на анализа.Когато този продукт PCR може да се открие, заедно с голямо количество продукти, докато, при използване на електрофореза в някои случаи не се забелязват.
Когато реално време PCR с използване положителни и отрицателни контролни проби.Например, положителни и отрицателни проби в изследването се анализират като отделни проучвания, в референтна проба добавя към всяка проба и подаване на всички етапи от анализа едновременно.
Днес има голям брой устройства за извършване на полимеразна верижна реакция.Те включват Bio-Rad, Applied Biosystems, Cepheid и Roche.Всяка от тях има предимства и недостатъци
Следва да се отбележи, че PCR - метод на диагностика, използвани в основен научен, изследователски и диагностични центрове по целия свят, тъй като дава възможност за извършване на незабавна интерпретация на резултатите.
