Derzeit entwickelt molekulare Diagnostik einen Mechanismus der Polymerase-Kettenreaktion (PCR), die den Anstoß für die Entwicklung einer großen Anzahl von Verfahren zur Diagnose war, basierend auf der Bestimmung des genetischen Materials.Zur Durchführung real-time PCR mit Genfragment (insbesondere der Nukleinsäure) des Erregers, die nicht in andere Personen zu finden ist.
Prinzip der PCR ist die Multiplikation einer bestimmten Pathogen-DNA-Fragment, millionenfach durch DNA-Polymerase in einem speziellen Gerät, wie den Thermocycler, die Wiederholung des Temperaturzyklus Regelung entsprechend einem vorbestimmten Programm stellt bezeichnet.
Diagnostics PCR ist es möglich, eine Reihe von Verstärkungen zu wiederholen, die Aufrechterhaltung der Enzymaktivität.Wenn die Verstärkung erfolgt glatt in einem Zyklus von der Anzahl der Kopien eines bestimmten DNA-Abschnitt des Erregers verdoppelt wird, nach dreißig Zyklen - hundertundzehn.Deshalb PCR wird verwendet, um die Diagnose der klein genug Pathogenen deren Identifikation nicht möglich ist, ohne dass es zu bestimmen.
Es sei darauf hingewiesen, dass die RNA nicht eine Vorlage für Echtzeit-PCR durchgeführt werden.Daher wird, um die virale RNA zu detektieren, bevor die erforderliche Verstärkung, eine mit dem entsprechenden Fragment korreliert DNA zu erhalten.Die Polymerase-Kettenreaktion ermöglicht, DNA und RNA des Pathogens zu messen.Die so erhaltene Information wird zur Überwachung der Wirksamkeit der Therapie, und die klinische Bewertung der Prognose verwendet.
Darüber hinaus Echtzeit-PCR keine weiteren Maßnahmen in Bezug auf die Entschlüsselung der Ziel-DNA oder Amplikons, die als Hindernis für die korrekte Diagnose dienen erfordern und führen zu falschen Ergebnissen.Dieser Ansatz ermöglicht es uns nicht auf die Stufe der Elektrophorese, was zu einer Verringerung der Gefahr einer Verunreinigung der Polymerase-Kettenreaktion führt zu verwenden.Auch aufgrund der Abnahme der Zahl der laufenden Manipulation des Erregers, reduziert die Zeit der Befragung wird der Prozess vereinfacht, die Wahrscheinlichkeit von Fehlern.PCR ermöglicht es Ihnen auch, um die anfängliche Anzahl von Kopien der DNA des Erregers in einer klinischen Studie festzulegen, um zur Ermittlung Zeiträume von Exazerbationen und rechtzeitig Maßnahmen, um den Patienten zu heilen.
Heute gibt es viele Methoden der Aufzeichnung Echtzeit-Amplifikation.Die am häufigsten verwendeten verschiedenen Techniken verwendet, korreliert mit Amplikon fluorogene Sonden, von denen die Strahlungsintensität in Abhängigkeit von der Akkumulation von Amplicon abhängig und in Echtzeit mit einem speziellen Instrument aufgenommen, genannt ein Thermozykler mit einer optischen Baugruppe.Dies bietet eine hohe Empfindlichkeit der Analyse.Wenn diese PCR-Produkt nachgewiesen werden kann, zusammen mit einer großen Menge von Nebenprodukten, während bei Verwendung der Elektrophorese in einigen Fällen ist es nicht bemerkt wird.
Wenn Echtzeit-PCR unter Verwendung von positiven und negativen Kontrollproben.Beispielsweise analysiert positiven und negativen Proben in der Forschung als separate Studien Referenzprobe gleichzeitig zu jeder Probe und einer Flanke alle Stufen der Analyse zugegeben.
Heute gibt es eine große Anzahl von Vorrichtungen zur Durchführung einer Polymerasekettenreaktion.Dazu gehören Bio-Rad, Applied Biosystems, Cepheid und Roche.Jedes hat Vorteile und Nachteile
Es sei darauf hingewiesen, dass der PCR werden - Verfahren zur Diagnose in der großen wissenschaftlichen, Forschungs- und diagnostischen Zentren auf der ganzen Welt verwendet werden, weil es die Möglichkeit zur Durchführung von Sofort Interpretation der Ergebnisse.
