Saat ini, diagnostik molekuler mengembangkan mekanisme polymerase chain reaction (PCR), yang merupakan dorongan untuk pengembangan sejumlah besar metode diagnosis, berdasarkan penentuan materi genetik.Untuk melaksanakan real-time PCR menggunakan fragmen gen (khususnya asam nukleat) dari agen penyebab, yang tidak ditemukan pada individu lainnya.Prinsip
dari PCR adalah perkalian dari jutaan fragmen DNA patogen tertentu kali oleh polimerase DNA dalam unit khusus, disebut sebagai pengendara sepeda termal, yang menyediakan pengulangan rezim suhu bersepeda menurut program yang telah ditentukan.
Diagnostik PCR memungkinkan untuk mengulangi serangkaian amplifikasi, mempertahankan aktivitas enzim.Ketika amplifikasi berlangsung lancar, dalam satu siklus dari jumlah salinan dari hamparan tertentu DNA dari patogen adalah dua kali lipat, setelah tiga puluh siklus - seratus sepuluh.Itulah sebabnya PCR digunakan untuk menentukan diagnosis patogen cukup kecil, identifikasi yang tidak mungkin tanpa itu.
Perlu dicatat bahwa RNA tidak bisa menjadi template untuk real-time PCR.Oleh karena itu, untuk mendeteksi RNA virus sebelum amplifikasi diperlukan untuk mendapatkan DNA berkorelasi dengan fragmen yang sesuai.Reaksi berantai polimerase memungkinkan untuk mengukur DNA dan RNA dari patogen.Informasi yang diperoleh digunakan untuk memantau efektivitas terapi, dan evaluasi klinis ramalan.
Selain itu, real-time PCR tidak memerlukan tindakan tambahan sehubungan dengan dekripsi dari DNA target atau amplikon, yang berfungsi sebagai penghalang untuk diagnosis yang benar dan menyebabkan hasil palsu.Pendekatan ini memungkinkan kita untuk tidak menggunakan tahap elektroforesis, yang mengarah ke penurunan risiko kontaminasi reaksi berantai polimerase.Juga, karena penurunan jumlah manipulasi yang sedang berlangsung dari patogen, mengurangi waktu survei, menyederhanakan proses, mengurangi kemungkinan kesalahan.PCR juga memungkinkan Anda untuk menentukan jumlah awal salinan DNA patogen dalam percobaan klinis untuk membantu mengidentifikasi periode eksaserbasi dan mengambil tindakan tepat waktu untuk menyembuhkan pasien.
Saat ini ada banyak metode pencatatan real-time amplifikasi.Yang paling umum digunakan teknik yang berbeda digunakan berkorelasi dengan amplikon probe fluorogenik, intensitas radiasi yang bervariasi tergantung pada akumulasi amplikon dan dicatat secara real time dengan menggunakan alat khusus, yang disebut thermocycler dengan modul optik.Ini memberikan tingkat tinggi sensitivitas analisis.Ketika produk PCR ini dapat dideteksi, bersama dengan jumlah besar oleh-produk sementara, ketika menggunakan elektroforesis, dalam beberapa kasus tidak melihat.
Ketika real-time PCR menggunakan sampel kontrol positif dan negatif.Misalnya, sampel positif dan negatif dalam penelitian dianalisis sebagai percobaan terpisah, sampel referensi pada saat yang sama ditambahkan ke setiap sampel dan lulus semua tahapan analisis.
Hari ini ada sejumlah besar perangkat untuk melaksanakan reaksi berantai polimerase.Ini termasuk Bio-Rad, Applied Biosystems, Cepheid dan Roche.Masing-masing memiliki kelebihan dan kekurangan
Perlu dicatat bahwa PCR - metode diagnosis yang digunakan dalam utama ilmiah, penelitian dan pusat diagnostik di seluruh dunia, karena memberikan kemungkinan untuk melaksanakan interpretasi langsung hasil.
