Attualmente, diagnostica molecolare sviluppato un meccanismo di reazione a catena della polimerasi (PCR), che è stato l'impulso per lo sviluppo di un gran numero di metodi di diagnosi, basato sulla determinazione del materiale genetico.Per l'esecuzione real-time PCR utilizzando frammento di gene (in particolare l'acido nucleico) dell'agente eziologico, che non si trova in altri individui.Principio
della PCR è la moltiplicazione di una certa milioni frammento patogeno DNA di volte da DNA polimerasi in una unità speciale, denominato termociclatore, che prevede la ripetizione del regime cicli di temperatura secondo un programma prestabilito.
Diagnostica PCR permette di ripetere una serie di ampliamenti, mantenendo l'attività enzimatica.Quando l'amplificazione avvenga gradualmente, in un ciclo del numero di copie di un determinato tratto di DNA del patogeno è raddoppiato, dopo trenta cicli - centodieci.Ecco perché PCR è utilizzato per determinare la diagnosi di piccole patogeni sufficienti, la cui identificazione è impossibile senza di essa.
Va notato che l'RNA non può essere un modello per PCR in tempo reale.Pertanto, al fine di rilevare l'RNA virale prima l'amplificazione necessaria per ottenere un DNA correlato con il suo frammento corrispondente.La reazione a catena della polimerasi permette di misurare DNA e RNA del patogeno.Le informazioni così ottenuto viene utilizzato per monitorare l'efficacia della terapia, e la valutazione clinica della previsione.
Inoltre, real-time PCR non richiede ulteriori interventi per quanto riguarda la decrittazione del DNA bersaglio o amplificati, che servono da barriera per una corretta diagnosi e portare a risultati falsi.Questo approccio consente di non utilizzare la fase di elettroforesi, che porta ad una diminuzione del rischio di contaminazione della reazione a catena della polimerasi.Inoltre, a causa della diminuzione del numero di manipolazione corso del patogeno, riduce il tempo di rilevazione, semplifica il processo, riduce la probabilità di errori.PCR consente inoltre di specificare il numero iniziale di copie di DNA del patogeno in uno studio clinico per aiutare a identificare i periodi di riacutizzazioni e di adottare misure tempestive per curare il paziente.
Oggi ci sono molti metodi di registrazione in tempo reale di amplificazione.Le diverse tecniche più comunemente usati hanno usato correlati con ampliconi sonde fluorogeniche, l'intensità della radiazione di che varia a seconda della accumulo di amplificato e registrati in tempo reale utilizzando uno strumento speciale, chiamato un termociclatore con un modulo ottico.Ciò fornisce un elevato livello di sensibilità dell'analisi.Quando il prodotto di PCR può essere rilevato, con una grande quantità di sottoprodotti mentre, quando si utilizza l'elettroforesi, in alcuni casi non è nota.
Quando real-time PCR utilizzando campioni di controllo positivi e negativi.Ad esempio, i campioni positivi e negativi nella ricerca analizzati come processi separati, campione di riferimento al contempo aggiunto a ciascun campione e un passaggio tutte le fasi dell'analisi.
Oggi ci sono un gran numero di dispositivi per effettuare una reazione a catena della polimerasi.Questi includono Bio-Rad, Applied Biosystems, Cefeide e Roche.Ognuno ha vantaggi e svantaggi
Va notato che la PCR - metodo di diagnosi utilizzato nella maggior scientifica, centri di ricerca e diagnostica in tutto il mondo, perché dà la possibilità di effettuare immediata interpretazione dei risultati.
