moment moleculaire diagnostiek ontwikkelde een mechanisme van polymerase kettingreactie (PCR), waarbij de impuls voor de ontwikkeling van een groot aantal methoden voor diagnose was gebaseerd op de bepaling van het genetisch materiaal.Voor het uitvoeren van real-time PCR met behulp genfragment (met name nucleïnezuur) van het veroorzakende agens, die niet in andere individuen.
principe van PCR is de vermenigvuldiging van een bepaald pathogeen DNA-fragment miljoenen keren door DNA polymerase in een speciale eenheid, aangeduid als de thermische cycler, waarbij herhaling van de temperatuurcycli regime volgens een vooraf bepaald programma biedt.
Diagnostics PCR maakt het mogelijk een reeks van amplificaties herhalen behoud van enzymactiviteit.Wanneer de versterking plaatsvindt vlot, in een cyclus van het aantal kopieën van een bepaald stuk DNA van de ziekteverwekker wordt verdubbeld, na dertig cycli - een honderd en tien.Daarom PCR wordt gebruikt om de diagnose klein genoeg pathogenen, het identificeren van die onmogelijk zonder bepalen.
Opgemerkt wordt dat het RNA sjabloon voor real-time PCR kan zijn.Daarom, om viraal RNA te detecteren voordat de amplificatie nodig om een DNA correleerde met bijbehorende fragment te verkrijgen.De polymerase-kettingreactie laat het DNA en RNA van het pathogeen meten.De aldus verkregen informatie wordt gebruikt om de doeltreffendheid van de therapie en klinische evaluatie van de prognose.
Bovendien, real-time PCR geen extra maatregelen ten aanzien van de decodering van het doelwit DNA of amplicons, die dienen als een belemmering voor de juiste diagnose vereisen en leiden tot foutieve resultaten.Deze aanpak laat het stadium van elektroforese, wat leidt tot een verminderde kans op besmetting van de polymerase kettingreactie te gebruiken.Ook, als gevolg van de afname van het aantal lopende manipulatie van het pathogeen, vermindert de tijd van het onderzoek vereenvoudigt het proces vermindert de kans op fouten.PCR kunt u ook de eerste aantal kopieën van het DNA van de ziekteverwekker te geven in een klinische studie te helpen perioden van exacerbaties identificeren en tijdig maatregelen te nemen om de patiënt te genezen.
Vandaag zijn er vele methoden voor het opnemen van real-time versterking.De meest gebruikte verschillende technieken gebruikt gecorreleerd amplicon fluorogene probes, de stralingsintensiteit die varieert afhankelijk van de ophoping van amplicon en geregistreerd in real time met een speciaal instrument, genaamd een thermocycler met een optische module.Dit verschaft een hoog niveau van gevoeligheid van de analyse.Wanneer dit PCR product kan worden gedetecteerd met een grote hoeveelheid bijproducten terwijl bij gebruik van elektroforese in sommige gevallen wordt niet opgemerkt.
Bij real-time PCR met behulp van positieve en negatieve controlemonsters.Bijvoorbeeld, positieve en negatieve monsters in het onderzoek geanalyseerd als afzonderlijke studies referentiemonster tegelijkertijd aan elk monster toegevoegd en pas alle fasen van het onderzoek.
Vandaag zijn er een groot aantal apparaten voor het uitvoeren van een polymerase kettingreactie.Deze omvatten Bio-Rad, Applied Biosystems, Cepheid en Roche.Elk heeft voor- en nadelen
Opgemerkt zij dat de PCR - methode voor de diagnose die in de grote wetenschappelijke onderzoek en diagnose centra wereldwijd, omdat het de mogelijkheid is tot onmiddellijke interpretatie van de resultaten.
