øjeblikket, molekylær diagnostik udviklet en mekanisme for polymerasekædereaktion (PCR), som var drivkraften for udviklingen af et stort antal af metoder til diagnosticering, baseret på bestemmelse af det genetiske materiale.Til udførelse realtids-PCR under anvendelse af genfragment (især nukleinsyre) af kausative middel, som ikke findes i andre individer.
Princippet for PCR er multiplikation af et bestemt patogen DNA-fragment millioner af gange af DNA-polymerase i en særlig enhed, benævnt thermocycler, der tilvejebringer en repetition af temperaturcyklus ordning ifølge et forudbestemt program.
Diagnostics PCR gør det muligt at gentage en række amplifikationer, der opretholder enzymaktiviteten.Når der foregår amplifikation glat, i en cyklus af antallet af kopier af en bestemt strækning af DNA af patogenet fordobles, efter tredive cykler - hundrede og ti.Det er derfor PCR anvendes til at bestemme diagnosen små nok patogener, identifikation af hvilket er umuligt uden.
Det skal bemærkes, at RNA, der ikke kan være en skabelon til realtids-PCR.Derfor med henblik på at påvise viralt RNA før amplifikation nødvendig for at opnå et DNA korreleret med den tilsvarende fragment.Polymerasekædereaktionen gør det muligt at måle DNA og RNA af patogenet.Det således opnåede oplysninger bruges til overvågning af effektiviteten af terapien, og klinisk vurdering af det forventede.
Hertil kommer, at real-time PCR ikke kræve yderligere tiltag med hensyn til dekryptering af målet DNA eller amplikoner, der tjener som en barriere for den korrekte diagnose og føre til falske resultater.Denne fremgangsmåde tillader os ikke at bruge den fase af elektroforese, hvilket fører til et fald i risikoen for kontaminering af polymerasekædereaktionen.Også på grund af faldet i antallet af igangværende manipulation af patogenet, reducerer tidspunktet for undersøgelsen, det forenkler processen, reducerer sandsynligheden for fejl.PCR giver dig også mulighed for at angive det oprindelige antal kopier af DNA af patogenet i et klinisk forsøg for at hjælpe med at identificere perioder med forværring og træffe rettidige foranstaltninger til at helbrede patienten.
dag er der mange metoder til registrering af realtidsamplifikation.De mest almindeligt anvendte forskellige anvendte teknikker korreleret med amplicon fluorogene prober, strålingsintensiteten varierer afhængigt af ophobning af amplikon og registreret i realtid ved hjælp af et særligt instrument, kaldet en thermocycler med et optisk modul.Dette giver en høj grad af følsomhed af analysen.Når dette PCR-produkt kan påvises, sammen med en stor mængde biprodukter, mens, når der anvendes elektroforese, i nogle tilfælde er det ikke bemærket.
Når realtids-PCR ved hjælp positive og negative kontrolprøver.For eksempel, positive og negative prøver i forskningen analyseres som separate forsøg, referenceprøve samtidig sat til hver prøve og en aflevering alle faser af analysen.
I dag er der et stort antal indretninger til udførelse af en polymerasekædereaktion.Disse omfatter Bio-Rad, Applied Biosystems, Cepheid og Roche.Hver har fordele og ulemper
Det skal bemærkes, at PCR - metode til diagnosticering anvendt i de store videnskabelige, forskning og diagnostiske centre rundt om i verden, fordi det giver mulighed for at udføre øjeblikkelig fortolkning af resultaterne.
