נכון לעכשיו, אבחון מולקולרי פיתח מנגנון של תגובת השרשרת של פולימראז (PCR), שהיה המניע לפיתוח של מספר גדול של שיטות אבחון, המבוסס על הנחישות של החומר הגנטי.לביצוע בזמן אמת PCR בר גן באמצעות (בפרט חומצות הגרעין) הסוכן סיבתי, שלא נמצא באנשים אחרים.עיקרון
של PCR הוא הכפל של מיליון קטע DNA הפתוגן מסוים של פעמים על ידי DNA פולימרז ביחידה מיוחדת, המכונה Cycler התרמית, המספקת חזרה על משטר הרכיבה על אופניים טמפרטורה על פי תכנית שנקבעה מראש.
PCR מאפשר לחזור על סדרה של amplifications, שמירה על פעילות האנזים.כשההגברה מתרחשת בצורה חלקה, במחזור אחד של מספר העותקים של קטע מסוים של DNA של הפתוגן כפול, לאחר שלושים מחזורים - מאה ועשר.זו הסיבה שPCR משמש לקביעת האבחנה של פתוגנים מספיק קטנים, זיהוי שאי אפשר בלעדיו.יש לציין
כי RNA לא יכול להיות תבנית בזמן אמת PCR.לכן, על מנת לזהות רנ"א הנגיפי לפני ההגברה הצורך לקבל DNA בקורלציה עם הבר המקביל שלה.תגובת השרשרת של פולימראז מאפשרת למדוד DNA ו- RNA של הפתוגן.המידע וכך השיג משמש לבקרת היעילות של הטיפול, והערכה קלינית של התחזית.
בנוסף, בזמן אמת PCR אינו דורש פעולה נוספת ביחס לפענוח של ה- DNA היעד או amplicons, המשמש כמחסום לאבחנה הנכונה ולהוביל לתוצאות שווא.גישה זו מאפשרת לנו לא להשתמש בבמה של אלקטרופורזה, מה שמוביל לירידה בסיכון לזיהום תגובת השרשרת של פולימראז.כמו כן, כתוצאה מהירידה במספר המניפולציה המתמשכת של הפתוגן, מפחית את הזמן של הסקר, זה מפשט את התהליך, מפחית את הסיכוי לטעויות.PCR גם מאפשר לך לציין את מספר עותקים הראשוני של ה- DNA של הפתוגן בניסוי קליני כדי לסייע בזיהוי תקופות של החמרות ולנקוט צעדים בזמן כדי לרפא את החולה.
כיום יש שיטות רבות של הקלטת הגברה בזמן אמת.הטכניקות שונות הנפוצות ביותר השתמשו בקורלציה עם בדיקות fluorogenic amplicon, עוצמת הקרינה של שמשתנה בהתאם להצטברות של amplicon ונרשמו בזמן אמת באמצעות מכשיר מיוחד, שנקרא thermocycler עם מודול אופטי.זה מספק רמה גבוהה של רגישות של הניתוח.כאשר מוצר ה- PCR זה יכול להיות מזוהה, יחד עם כמות גדולה של זמן שלפי מוצרים, בעת שימוש באלקטרופורזה, בחלק מהמקרים הוא לא שם לב.
כאשר בזמן אמת באמצעות PCR דגימות בקרה חיוביות ושליליות.לדוגמא, דגימות חיוביות ושליליות במחקר ניתחו כניסויים נפרדים, מדגם התייחסות באותו הזמן נוספו לכל דגימה ולעבור את כל השלבים של הניתוח.
כיום יש מספר גדול של מכשירים לביצוע תגובת שרשרת של פולימראז.אלה כוללים Bio-Rad, Biosystems יישומית, קפאידי ורוש.לכל אחד יש יתרונות וחסרונות
יצוין כי PCR - שיטת אבחון המשמש במדעי, מחקר הגדול ומרכזי אבחון ברחבי העולם, כי זה נותן את האפשרות לבצע פרשנות מיידית של התוצאות.
