Actuellement, le diagnostic moléculaire a développé un mécanisme de réaction en chaîne par polymérase (PCR), qui a été l'impulsion pour la mise au point d'un grand nombre de méthodes de diagnostic, sur la base de la détermination du matériel génétique.Pour effectuer une PCR en temps réel en utilisant le fragment de gène (en particulier l'acide nucléique) de l'agent pathogène, qui ne se trouve pas dans d'autres individus.Principe
de PCR est la multiplication d'un certain millions de fragments d'ADN de l'agent pathogène de fois par de l'ADN polymerase dans un appareil spécial, dénommé le cycleur thermique, qui fournit répétition du régime de cyclage de température selon un programme prédéterminé.
PCR de diagnostic, il est possible de répéter une série d'amplifications, le maintien de l'activité enzymatique.Lorsque l'amplification se fasse en douceur, dans un cycle du nombre de copies d'un tronçon de l'ADN de l'agent pathogène est doublé, après trente cycles - cent dix.Voilà pourquoi PCR est utilisée pour déterminer le diagnostic de petits agents pathogènes assez, l'identification de ce qui est impossible sans elle.
Il convient de noter que l'ARN ne peut pas être une matrice pour la PCR en temps réel.Par conséquent, afin de détecter l'ARN viral avant l'amplification nécessaire à l'obtention d'un ADN en corrélation avec son fragment correspondant.La réaction en chaîne par polymérase permet de mesurer ADN et l'ARN de l'agent pathogène.L'information ainsi obtenue est utilisée pour contrôler l'efficacité de la thérapie, et de l'évaluation clinique de la prévision.
En outre, la PCR en temps réel ne nécessite pas de mesures supplémentaires par rapport au décryptage de l'ADN ou amplicons cible, qui servent comme un obstacle à un diagnostic correct et conduisent à des résultats erronés.Cette approche permet de ne pas utiliser le stade de l'électrophorèse, ce qui conduit à une diminution du risque de contamination de la réaction en chaîne par polymérase.En outre, en raison de la diminution du nombre de manipulation en cours de l'agent pathogène, réduit le temps de l'enquête, il simplifie le processus, réduit la probabilité d'erreurs.PCR permet également de spécifier le nombre initial de copies de l'ADN de l'agent pathogène dans un essai clinique pour aider à identifier les périodes d'exacerbation et de prendre des mesures opportunes pour guérir le patient.
Aujourd'hui, il existe de nombreuses méthodes d'amplification d'enregistrement en temps réel.Les différentes techniques les plus couramment utilisés en corrélation avec amplicon sondes fluorogènes, l'intensité du rayonnement qui varie en fonction de l'accumulation de amplicon et enregistrées en temps réel à l'aide d'un instrument spécial, appelé un thermocycleur avec un module optique.Ceci permet d'obtenir un haut niveau de sensibilité de l'analyse.Lorsque ce produit de PCR peut être détectée, et aussi d'une grande quantité de sous-produits tandis que, pour l'utilisation de l'électrophorèse, dans certains cas, il n'a pas été remarqué.Lorsque
PCR en temps réel en utilisant des échantillons de contrôle positifs et négatifs.Par exemple, les échantillons positifs et négatifs dans la recherche analysés comme des procès distincts, l'échantillon de référence dans le même temps ajouté à chaque échantillon et une passe toutes les étapes de l'analyse.
Aujourd'hui, il existe un grand nombre de dispositifs pour la réalisation d'une réaction en chaîne par polymérase.Ceux-ci comprennent Bio-Rad, Applied Biosystems, Cepheid et Roche.Chacun a ses avantages et inconvénients
Il convient de noter que le PCR - méthode de diagnostic utilisé dans la majeure scientifiques, de recherche et centres de diagnostic dans le monde entier, car il donne la possibilité de procéder à une interprétation immédiate des résultats.
